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技術(shù)文章

小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)方法

更新更新時(shí)間:2025-02-27 瀏覽次數(shù):687

小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成半選擇性屏障,該屏障對(duì)于肺氣體交換,調(diào)節(jié)液體和可溶物在血液與肺間質(zhì)之間的流動(dòng)具有重要意義。它還具有代謝功能,可以執(zhí)行一定的非呼吸功能。在肺損傷中,肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞是活性氧類的重要靶細(xì)胞之一。

在肺炎的發(fā)生過(guò)程中,神經(jīng)體液介質(zhì)和氧化劑作用于內(nèi)皮細(xì)胞,使得細(xì)胞間隙滲透性增加,蛋白質(zhì)由血液進(jìn)入間質(zhì)。細(xì)胞間隙滲透性的增加導(dǎo)致低氧血癥,出現(xiàn)成人呼吸窘迫綜合征和非心源性肺水腫。

小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞來(lái)源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常肺組織,細(xì)胞為上皮樣,多角形細(xì)胞,貼壁培養(yǎng),采用CD31免疫熒光染色鑒定為陽(yáng)性,細(xì)胞純度高于90%,不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

1.試驗(yàn)所需儀器設(shè)備及試劑

(1)儀器

儀器名稱

規(guī)格型號(hào)

生物安全柜

BSC-1500ⅡA2-X

CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱

BC-J160S

熒光倒置顯微鏡

DS-Ri2

高速冷凍離心機(jī)

Multifuge X1R

電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱

DHG-9123A

電熱恒溫震蕩水槽

DK-2B

(2)試劑耗材

試劑名稱

規(guī)格/貨號(hào)

T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

430639

血球計(jì)數(shù)板

Neubauer improved

24孔板專用細(xì)胞爬片

YA0350

細(xì)胞培養(yǎng)孔板

WHB-24

胎牛血清

1414426

內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基

Primed-icell-002

0.25%胰蛋白酶(含0.02%EDTA)

1734858

2、小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)

1) 將5-10d的乳鼠浸泡入75%乙醇中,移入生物安全柜,

2) 從胸部解剖乳鼠,取出雙肺置于預(yù)冷的PBS中,盡可能的除去結(jié)締組織等,

3) 取肺邊緣部分,剪碎,將組織塊移入T25培養(yǎng)瓶中,倒置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中,

4) 2h后,培養(yǎng)瓶中注入2 mL內(nèi)皮培養(yǎng)基,小心將培養(yǎng)瓶正置于培養(yǎng)箱,確保組織塊不會(huì)飄起來(lái),

5) 每3d換液2mL,待細(xì)胞從組織塊中爬出來(lái)后,隔2d換液,待細(xì)胞融合達(dá)到60-70%左右時(shí),去除組織塊,將肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞重新鋪瓶。

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