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說說大鼠心肌細(xì)胞H9C2處理和傳代方法

更新時(shí)間:2022-04-20 瀏覽次數(shù):2008

  大鼠心肌細(xì)胞H9C2是原始克隆細(xì)胞系的亞克隆,由Kimes和Brandt組成,從胚胎bd1x大鼠心臟組織中獲得,表現(xiàn)出骨骼肌的許多特征。該細(xì)胞系中的成肌細(xì)胞可以融合形成多核肌管并對(duì)乙酰膽堿刺激作出反應(yīng)。如果培養(yǎng)基中的血清濃度下降到1%,融合就會(huì)迅速發(fā)生。
  
  大鼠心肌細(xì)胞H9C2處理:
  
  1、細(xì)胞復(fù)蘇:將裝有1ml細(xì)胞懸液的冷凍管于37℃水浴中搖勻解凍,加入4ml培養(yǎng)基混勻。1000轉(zhuǎn)離心4分鐘,棄上清,加入1-2ml培養(yǎng)基,吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px培養(yǎng)皿中,加入約8ml培養(yǎng)基培養(yǎng)過夜)。第二天,換液并檢查細(xì)胞密度。
  
  2、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)到80%-90%,就可以進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
  
  大鼠心肌細(xì)胞H9C2傳代方法:
  
  1、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣鎂離子的PBS洗滌細(xì)胞1-2次。
  
  2、在培養(yǎng)瓶中加入2ml消化液(0.25%trypsin-0.53mmedta),放入37℃培養(yǎng)箱消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況。如果大部分細(xì)胞變圓脫落,迅速收回控制臺(tái),輕敲培養(yǎng)瓶數(shù)次,加入少量培養(yǎng)基終止消化。
  
  3、按6-8ml/瓶加入培養(yǎng)基,輕輕打勻,吸出,1000rpm離心4分鐘,棄上清,加入1-2ml培養(yǎng)基吹勻。
  
  4、接受細(xì)胞后的一次傳代,建議將細(xì)胞懸液按1:2的比例分裝到裝有6ml培養(yǎng)基的新培養(yǎng)皿或瓶子中。建議冷凍1個(gè)備用,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2至1:5的比例進(jìn)行。
  
  5、細(xì)胞冷凍保存:當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)良好時(shí),可以冷凍保存。

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