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小鼠的海馬神經元細胞HT22培養操作規程

更新時間:2023-06-16 瀏覽次數:1672

  小鼠的海馬神經元細胞HT22培養操作規程,供參考:
 
  一、小鼠海馬神經元細胞(HT22)培養基及培養凍存條件準備:
  1、準備DMEM培養基;優質胎牛血清,10%;雙抗,1%。
  2、培養條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
  3、凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。
 
  二、細胞處理:
  1、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
  2、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

  三、對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
  (1)棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
  (2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入2ml此細胞的全培養基終止消化。
  (3)輕輕吹打后吸出,移入15ml離心管中,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養液后吹勻。
  (4)移入到事先準備好的含有5ml培養基的T-25培養瓶中或含有14ml培養基的T-75培養瓶中培養。
  3、小鼠的海馬神經元細胞HT22細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。
 
小鼠的海馬神經元細胞HT22

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